1. Úvod
4-Metoxysalicylát draselný (4MSK), so štruktúrou podobnou kyseline salicylovej, je nová liečivá bieliaca zložka používaná v kozmetike pre svoje bieliace účinky a je účinnou zložkou v kozmetike. Má schopnosť zlepšiť rovnováhu tónu pleti, zmierniť nadmernú pigmentáciu, upraviť atypickú proliferáciu epidermy, podporiť vylučovanie melanínu a zabrániť vzniku pieh a škvŕn.

2. Hlavné funkcie
Pigmentácia, pehy a nepriehľadnosť sú problémom mnohých ázijských žien, a preto sa produkty na zosvetlenie pleti tešia zo strany ázijských žien veľkému záujmu. Účinnosť 4-metoxysalicylátu draselného bola skúmaná poprednými kozmetickými spoločnosťami a výsledky sú uvedené nižšie.
2.1. Inhibícia melanogenézy
Bunky myšacieho melanómu (B16) sa kultivovali tri dni v prítomnosti a neprítomnosti 4MSK a meral sa počet buniek a množstvo produkovaného melanínu pri danom počte buniek. Bol získaný pomer počtu buniek a množstva melanínu v prítomnosti 4MSK k množstvu melanínu v neprítomnosti 4MSK a týmto spôsobom bol analyzovaný účinok 4MSK na melanogenézu.
Výsledky ukazujú, že počet buniek a množstvo melanínu po 3 dňoch od pridania 4MSK sú uvedené na obrázku 2. Potvrdilo sa, že 4MSK mal inhibičný účinok na melanogenézu závislý od koncentrácie a výsledky Williamsovho testu byť štatisticky významné pre adičné klastre 3 x 10-4 a 10-3 mol/l v porovnaní s absenciou pridania 4MSK. Pre žiadnu z testovaných koncentrácií 4MSK sa však nezistil žiadny účinok na bunkovú proliferáciu.

2.2. Impedancia aktivity kuraminidázy
Na vyhodnotenie tyrozinázovej aktivity v nebunkových systémoch bol substrátom L-DOPA a množstvo produkcie dopacrómu vyplývajúce z jeho metabolizmu sa testovalo testom absorbancie pri 475 nm.
Rýchlosť impedancie tyrozinázovej aktivity pomocou 4MSK sa určila pridaním roztoku 4MSK a lyzátu do vyššie uvedeného reakčného systému a ponechaním tejto zmesi reagovať 90 sekúnd pri teplote miestnosti, čím sa získal pomer testovaných hodnôt, keď sa pridal roztok 4MSK v porovnaní s lyzátová skupina.

2.3. Inhibícia UV-indukovaných účinkov na diferenciáciu keratinocytov
Ihneď po ožiarení 3D modelu kože UV svetlom bol na povrch modelu kože pridaný roztok 4MSK, inkubovaný 30 minút a potom bol 4MSK odstránený a inkubovaný 1 deň. Roztok 4MSK bol nahradený lyzačným médiom na kontrolné účely. Modely kože odobraté po inkubácii sa zafarbili antitropínovými protilátkami na imunohistochemické štúdie a okamžitou RT-PCR (reverzná transkripcia-polymerázová reťazová reakcia) na kvantifikáciu expresie tropínovej mRNA.
Ako výsledok imunohistochemických štúdií s anti-trofoblastovými protilátkami bol trojrozmerný model kože podobný testu in vivo s prítomnosťou trofoblastového proteínu, markera diferenciácie, v blízkosti zrnitej vrstvy. Po jednom dni inkubácie tohto modelu kože v UV jamkách sa expresia troponínu znížila. Pridanie 4MSK do modelu kože bezprostredne po UV ožiarení významne potlačilo UV-indukovaný pokles expresie troponínu.
Okrem toho kvantitatívna PCR analýza RNA extrahovanej z rovnakého modelu kože ukázala, že zníženie expresie mRNA taurolitioneínu v skupine ožiarenej UV žiarením bolo potlačené v skupine s pridanou 4MSK. Výsledky potvrdené imunohistochemickými štúdiami, teda pokles expresie troponínu na úrovni proteínu a potlačenie poklesu expresie 4MSK, sa potvrdili aj na úrovni mRNA.

2.4 Obranný účinok ľudskej pigmentácie
Dvanásť zdravých dospelých dobrovoľníkov mužského pohlavia bolo vystavených UVA a UVB vlnovým dĺžkam na 4 miestach na bruchu počas 3 dní s použitím umelého zdroja UV svetla s ekvivalentom lMED (minimálna erytémová dávka) raz denne pre každý testovaný subjekt. Štyri krémy, 1 percento, 3 percentá, 5 percent 4MSK a základný krém boli použité ako testovacie vzorky a aplikované 3-krát denne počas 7 dní od začiatku vystavenia UV žiareniu. Na vyhodnotenie stupňa hyperpigmentácie sa tón pleti pred a po aplikácii dvakrát zmeral farebným testerom a spriemeroval sa, aby sa získala miera zmeny pred a po expozícii, pričom sa porovnávali oblasti, kde boli aplikované rôzne koncentrácie krémov 4MSK, s oblasťami, kde aplikovali sa základné krémy.
Ako subjekty bolo použitých všetkých 12 mužov. Priemerný vek subjektov bol 38,4 rokov. Hodnoty L* pre každé miesto aplikácie pred aplikáciou testovaného výrobku sú uvedené v tabuľke la. Hodnoty L* sa analyzovali na každom testovacom mieste pred aplikáciou testovaného výrobku a potvrdili, že medzi miestami pred začatím testu nebol žiadny rozdiel v tóne pokožky.
Hodnoty AL pre každé testovacie miesto pred aplikáciou testovaného výrobku a 7 dní po aplikácii sú znázornené na obrázku nižšie. ΔL miesta aplikácie s 1 percentom krému 4MSK bolo štatisticky významne menšie ako ΔL miesta aplikácie so základným krémom. Okrem toho sa AL postupne zmenšoval so zvyšujúcim sa obsahom 4MSK, čím sa dospelo k záveru, že 4MSK má antipigmentačný účinok závislý od dávky. Okrem toho neboli počas testovacieho obdobia pozorované žiadne kožné abnormality, ako je opuch, začervenanie alebo svrbivá rakovina.

2.5. Zlepšenie nerovnováhy proliferácie a diferenciácie keratinocytov a podpora hladkého uvoľňovania melanínu
Štúdie na melanocytoch preukázali významnú inhibíciu melanogenézy pri koncentrácii 3 x 10-4 mol/l, s plným potenciálom v porovnaní s existujúcimi bieliacimi aktívnymi zložkami. Štúdie o mechanizme účinku inhibície produkcie melanínu a o tom, či sa bráni aktivite enzýmu kuraminidázy, ktorá je potrebná na produkciu melanínu, ukázali, že 4MSK nielenže inhibuje produkciu melanínu, ale má aj účinok, že bráni aktivite kuraminidázy.
Je známe, že hlavnou príčinou pigmentácie je UV svetlo, ktoré spôsobuje prechodnú abnormalitu v expresii diferenciačných markerov v bunkách tvoriacich keratín. Na základe našich zistení, že nerovnováha diferenciačného markera je chronická aj bez UV ožiarenia v mieste pigmentácie, sme zrealizovali štúdiu o normalizácii diferenciačného markera pomocou 4MSK. Pomocou trojrozmerného modelu kože sme preukázali, že 4MSK má obranný účinok proti nevyváženej expresii tropomyozínu, markera diferenciácie keratinocytov, na úrovni mRNA aj proteínu.

Po druhé, testy in vivo potvrdili, že testovaný produkt obsahujúci 15 percent 4MSK má obranný účinok proti UV pigmentácii závislý od koncentrácie. Počas celého testovacieho obdobia neboli pozorované žiadne kožné abnormality v dôsledku použitia testovaného produktu obsahujúceho 4MSK, vďaka čomu je 4MSK bezpečný a účinný ako kozmetická prísada.
In vitro štúdie potvrdili priamy inhibičný účinok 4MSK na melanogenézu a jeho vplyv na proliferáciu a diferenciáciu buniek tvoriacich keratín. Obe tieto akcie majú obranný účinok na tvorbu a uvoľňovanie melanínu, ktorý spôsobuje nadmerné ukladanie melanínu v koži. Testy in vivo ukázali, že 4MSK je vynikajúcou obranou proti UV pigmentácii, a preto sa predpokladá, že 4MSK je účinný aj proti pigmentácii, pehám a mdlosti vo forme prebytočného kožného melanínu.

3. Aplikácie

4-metoxysalicylát draselný sa používa najmä v kozmetických výrobkoch.

4. Vývojový diagram

2,4-Kyselina dihydroxybenzoová → pridať alkalický vodný roztok hydroxidu sodného → rozpustiť → vychladnúť → → upraviť PH → zraziť → odstrediť → opláchnuť → vysušiť → surová 4-kyselina metoxysalicylová → zahriať → premiešať → extrahovať filter → vysušiť → čistá 4-kyselina metoxysalicylová → upraviť PH → miešať 3 → získať rozpúšťadlo → vychladnúť kryštalizácia → extrahovať filter → surová 4-draselná kyselina metoxysalicylová → rozpustiť surovú → odfarbiť → extrahovať filter → vychladnúť kryštalizácia → vákuum suchá → čistá 4-draselná soľ kyseliny metoxysalicylovej

5. Štandard kvality

Podľa Enterprise Standard

Položky	technické údaje	Výsledky
Vzhľad	Biely až sivobiely prášok	Biely prášok
Identifikácia	HPLC, NMR, LC-MS	Vyhovuje norme
Ťažké kovy	Menej ako alebo rovné 20 str./min	<20ppm
Ako	Menej alebo rovné 2 str./min	<2ppm
Strata sušením	Menšie alebo rovné 0,5 percenta	0.29 percent
Jediná nečistota	Menšie alebo rovné 1.0 percent	Vyhovuje
Test (HPLC)	Väčšie alebo rovné 98.0 percent	98,56 percenta